Il cDNA è un doppio filamento di DNA sintetizzato a partire da una molecola di mRNA, tramite l’utilizzo di una trascrittasi inversa virale prima, e di una polimerasi poi.
Essendo ottenuto dalla retrotrascrizione di mRNA che ha già subito il processo di splicing, il cDNA non presenta sequenze introniche non codificanti, il che consente la sua espressione anche in sistemi procariotici, altrimenti non in grado di eliminarle durante il processamento.